人CTGF定量EIA試劑盒使用說明
更新時間：2009-12-23 | 點(diǎn)擊率：2758
人CTGF定量EIA試劑盒使用說明
原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心ABC-EIASA法。用抗人CTGF單抗包被于酶標(biāo)板上，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的CTGF與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗人CTGF，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入酶底物TMB，出現(xiàn)藍(lán)色，加終止液硫酸，顏色變黃，在450nm處測OD值，CTGF濃度與OD值成正比，可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的CTGF濃度。
試劑盒組成
1． 96孔微孔板：一塊，已包被抗人CTGF單抗。
2． 樣品稀釋液：一瓶
3． *抗體工作液：一瓶
4． 酶標(biāo)抗體工作液：一瓶
5． 底物稀釋液：兩瓶
6． 終止液：一瓶
7． 洗滌液（20X）：一瓶
8． 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干粉，2000ng/ml ）：一管
9． 坐標(biāo)紙：一張
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1． 洗滌液：用重蒸水1：20稀釋。
2． 收集血液標(biāo)本：采集血清或培養(yǎng)液盡早檢測，2-8℃保存一天；需更長時間須冷凍（-20℃）保存，避免反復(fù)凍融。
3． 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前每管中加入100ul蒸餾水溶解后即可。
4． 底物工作液配制：使用前將OPD片放入底物稀釋液中溶解，每片加液5ml。
檢測程序
1． 建立標(biāo)準(zhǔn)曲線：設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔8孔，每孔中各加入樣品稀釋液100ul，*孔加標(biāo)準(zhǔn)品100ul，混勻后用加樣器吸出100ul，移至第二孔。如此反復(fù)作倍比稀釋至第七孔，后，從第七孔中吸出100ul棄去，使之體積均為100ul。第八孔為空白對照。
2． 加樣：待測品孔每孔各加入待測樣品100ul。
3． 將反應(yīng)板充分混勻后置37℃ 120分鐘。
4． 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4－6次，向?yàn)V紙上印干。
5． 除空白孔外，每孔中加入*抗體工作液50ul。
6． 將反應(yīng)板置37℃ 60分鐘。
7． 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4－6次，向?yàn)V紙上印干。
8． 除空白孔外，每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。
9． 將反應(yīng)板置37℃ 60分鐘。
10．洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4－6次，向?yàn)V紙上印干
11．每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)5－15分鐘（視顏色深淺靈活掌握）。
12．每孔加入50ul終止液混勻。
13．在450nm處測吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1． 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2． 以標(biāo)準(zhǔn)品1000、500、250、125、62、31.25、15.63、0ng/ml之OD值在半對數(shù)紙上作圖，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3． 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)CTGF含量。
注意事項(xiàng)
1． 本試劑盒宜置-20℃冰箱保存。
2． 本試劑盒取出的試劑在室溫條件下使用，溶液應(yīng)輕輕搖勻后使用。
3． 本試劑盒含2M硫酸，不要將它與含疊氮鈉的廢物混在一起。
4． 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
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