DNA電泳常見問(wèn)題分析

  DNA電泳常見問(wèn)題分析

常見問(wèn)題 可能原因 建議解決方案

DNA降解避免核酸酶污染

電泳緩沖液陳舊

電泳緩沖液多次使用后，離子強(qiáng)度降低，pH值升高，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果。

建議經(jīng)常更換電泳緩沖液。

電泳條件不合適

電泳時(shí)電壓一般不超過(guò)20V/cm，溫度<30℃，大分子量DNA電泳時(shí)溫度應(yīng)<15℃，檢查電泳

緩沖液是否有足夠的緩沖能力。

DNA上樣量過(guò)多減少凝膠中DNA的上樣量

DNA含鹽量過(guò)高電泳前通過(guò)乙醇沉淀除去過(guò)多的鹽等雜質(zhì)

DNA條帶模糊

DNA有蛋白污染電泳前用酚/氯仿抽提除去蛋白等雜質(zhì)

DNA變性電泳前勿加熱并用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA

對(duì)于λ Hin dⅢ 片段

cos位點(diǎn)復(fù)性

電泳前于65℃加熱DNA5分鐘，然后在冰上冷卻5分鐘。

電泳條件不合適

電泳時(shí)電壓一般不超過(guò)20V/cm，溫度<30℃，大分子量DNA電泳時(shí)溫度應(yīng)<15℃，建議經(jīng)常

更換電泳緩沖液。

DNA變性電泳前勿加熱并用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA

DNA上樣量不夠增加凝膠中DNA的上樣量

DNA降解避免核酸酶污染

DNA電泳常見問(wèn)題分析

DNA跑出凝膠縮短電泳時(shí)間、降低電壓、提高凝膠濃度

對(duì)于EB染色的凝膠所

用光源不合適

應(yīng)用短波長(zhǎng)（254nm）的紫外光源

小分子DNA跑出凝膠縮短電泳時(shí)間、降低電壓、提高凝膠濃度

分子大小相近的DNA

帶不易分辨

延長(zhǎng)電泳時(shí)間并核準(zhǔn)正確的凝膠濃度

DNA變性電泳前勿加熱并用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA

條帶很弱或

無(wú)DNA條帶

DNA分子量太大常規(guī)

凝膠不合適

在脈沖凝膠電泳上分析

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