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Western Blot膜的選擇

更新時間:2012-04-20  |  點擊率:7483

          Western Blot印跡常用的轉(zhuǎn)移膜主要是硝酸纖維素膜(Nitrocellulose Blotting Membranes,NC)和PVDF膜,此外也有用尼龍膜、DEAE纖維素膜做蛋白印跡。
選擇的根據(jù)主要有:
a. 膜與目的蛋白分子的結(jié)合能力(也就是單位面積的膜能結(jié)合蛋白的載量),以及膜的孔徑(也就是攔截蛋白的大?。?;
b. 不影響后續(xù)的顯色檢測(也就是適和用于所選的顯色方法,信噪比好);
c. 如果后繼實驗有其他要求,比如要做蛋白測序或者質(zhì)譜分析,還要根據(jù)不同目的來挑選不同的轉(zhuǎn)移膜。

NC膜的生產(chǎn)原理

勻漿配比

  購買回來的原料硝酸纖維素粒子是一種非常普遍的有機化學物,溶解形成混漿,在該漿體內(nèi),通過加入一定比例的試劑來調(diào)整后形成的膜的性質(zhì),一般主要包含表面活性劑/高分子聚合物/鹽離子/成型劑等溶解的一個緩沖體系內(nèi)。不同的廠家加入的溶液配方不一樣,導致了產(chǎn)品的差異。

滾筒鋪膜

  配好的勻漿通過滾筒,形成了一張薄膜,平攤在十分光滑的平面載體上。過程與造紙非常相似。

成型

  當勻漿內(nèi)的成型劑開始揮發(fā),膜逐步干燥成型。同時在這個過程中由于溫度比較高,有些廠家在這個過程采取了在密閉腔體內(nèi)成型,同時補充配方溶液的形式,來避免一些有效成分的蒸發(fā)。

切割

  通過以上步驟生產(chǎn)出來的膜是呈一個寬度極大的產(chǎn)品,寬度的大小直接和滾筒的大小相關,滾筒越大生產(chǎn)越方便,但設備的成本也越高.寬膜要經(jīng)過切割才能成為我們購買到的25mm或18mm(或20mm)寬的膜,而長度上,成品卷膜和寬膜的長度是相同的.理論上可以讓廠家切成你需要的任意寬度,但這樣會造成原料的浪費和人力成本的增加,后來廠商在和試紙生產(chǎn)廠家的協(xié)調(diào)過程中,綜合用料成本和生產(chǎn)便利性基本確定了上面說的寬度,以次為標準。

 

  從生產(chǎn)過程,我們可以得知,NC膜本身已經(jīng)添加了表面活性劑來改善親水能力,而且已經(jīng)存在有一定的緩沖系統(tǒng)(雖然對紙條測試影響不會很大)。

 

PVDF膜

 
  PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜(polyvinylidene fluoride)是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的,膜孔徑有大有小,隨著膜孔徑的不斷減小,膜對低分子量的蛋白結(jié)合就越牢固。大于20000的蛋白選用0.45um的膜,小于20000的蛋白選用0.2um的膜。PVDF膜在使用是需預處理,用甲醇處理的目的是活化膜上的正電基團,使其更容易與帶負電的蛋白結(jié)合。PVDF膜具有較高的機械強度,是印跡法中的理想固相支持物材料。
 
  分類
 
  1、水處理用PVDF膜,分為超濾膜和微濾膜兩種,主要用于污水、海水淡化等的前處理,清除大分子、細菌、泥沙等雜志
 
  2、戶外建筑用PVDF膜,主要用戶戶外建筑的玻璃、外墻、戶外廣告牌等的保護,主要是耐老化和耐磨功能
 
  3、電池用PVDF膜,包括在燃料電池和鋰離子聚合物電池中的隔膜應用
 
  PVDF的主要性能:
 
  · 機械強度與堅韌度高
 
  · 防霉菌性
 
  · 高耐磨性
 
  · 對氣體和液體的高耐滲透性
 
  · 耐熱穩(wěn)定性好
 
  · 阻燃,低煙
 
  · 溫度提升過程中抗蠕變性好
 
  · 純度高
 
  · 容易進行熔體加工
 
  · 耐對大多數(shù)化學品與溶劑
 
  · 兼有剛性的和柔韌的形態(tài)
 
  · 抗紫外線和核輻射性
 
  · 抗沖擊性能
 
  · 耐候性
 
  · 耐低溫達-40℃

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