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看完本篇你就會對TEV重組型蛋白酶有更多了解

更新時間:2023-06-02  |  點擊率:2178
  TEV重組型蛋白酶是一種常用的蛋白酶,用于在蛋白質(zhì)表達和純化過程中切割目標(biāo)蛋白的亞細胞定位肽或親和標(biāo)簽。在此文章中,我們將探討TEV重組型蛋白酶的起源、結(jié)構(gòu)和應(yīng)用方面。
 
  TEV全稱為煙草花葉病毒(Tobacco Etch Virus)編碼的蛋白酶,其天然形式被廣泛分布于植物體內(nèi),能夠剪切寄生于植物細胞內(nèi)的RNA病毒基因組。人工合成的TEV重組型蛋白酶出現(xiàn)于1995年,由加拿大多倫多大學(xué)的Brian Seed教授及其同事開發(fā)制備,能夠特異性地識別和切割TEV蛋白外殼上的底物序列。隨后,該產(chǎn)品被廣泛運用于蛋白質(zhì)表達和純化中,成為生物技術(shù)領(lǐng)域的重要工具之一。
 
  該產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)與活性機理已經(jīng)被詳細研究。它是一種由27kDa蛋白質(zhì)構(gòu)成的單亞單位酶,具有切割底物序列ENLYFQ/G的特異性。其結(jié)構(gòu)包括一個N末端區(qū)域、一個中央峽谷和一個C末端區(qū)域。中央峽谷是TEV重組型蛋白酶與其底物序列結(jié)合的關(guān)鍵部位,其中含有兩個天然氨基酸殘基草酰胺和谷氨酰胺,能夠與底物序列內(nèi)的丙氨酸和天冬氨酸發(fā)生水解反應(yīng),從而使目標(biāo)蛋白被切割成為兩段。
 

 

  在蛋白質(zhì)表達和純化過程中,該產(chǎn)品常用于清除親和純化標(biāo)簽或者亞細胞定位肽,從而得到純凈的目標(biāo)蛋白。例如,在重組蛋白表達系統(tǒng)中,可以將目標(biāo)蛋白與親和標(biāo)簽如GST等融合表達,并在蛋白純化后進行TEV酶切割,以去除標(biāo)簽;在細胞定位研究中,可以將熒光蛋白和其它亞細胞定位肽融合表達,然后用TEV酶去除亞細胞定位肽,以實現(xiàn)對熒光蛋白真正的定位。此外,該產(chǎn)品還可用于破壞蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,或者在結(jié)構(gòu)生物學(xué)中用于切割蛋白晶體以便進行X射線衍射分析。
 
  綜上所述,TEV重組型蛋白酶是一種常用的蛋白酶,其起源于植物病毒,結(jié)構(gòu)特異性地識別和切割底物序列ENLYFQ/G。在蛋白質(zhì)表達和純化、蛋白質(zhì)相互作用

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