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了解一下脂肪酸合成酶測(cè)試盒的使用方法吧

更新時(shí)間:2023-05-04  |  點(diǎn)擊率:909
  脂肪酸合成酶測(cè)試盒是一種用于檢測(cè)脂肪酸合成酶活性的試劑盒。它可以快速、準(zhǔn)確地檢測(cè)樣品中脂肪酸合成酶的活性水平,可用于體外和體內(nèi)活性測(cè)定。
 
  細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的積累是脂質(zhì)合成與分解失衡的結(jié)果。脂肪酸合成增多,而氧化分解降低,會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積累。FAS 是脂肪酸合成關(guān)鍵酶,催化乙酰輔酶 A 和丙二酰輔酶 A 而生成長(zhǎng)鏈脂肪酸。FAS 普遍表達(dá)于各種組織細(xì)胞中,在哺乳動(dòng)物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達(dá)豐富。
 

 

  以下是使用脂肪酸合成酶測(cè)試盒的步驟:
 
  1.樣品制備:將待測(cè)樣品提取出其中的脂質(zhì),并將脂質(zhì)轉(zhuǎn)化為三酰甘油(TAG)。這一步通常采用氯仿-甲醇混合物(2:1)進(jìn)行脂質(zhì)提取,然后用異丙醇-氯仿(1:1)將脂質(zhì)轉(zhuǎn)換為T(mén)AG。
 
  2.反應(yīng)液制備:根據(jù)說(shuō)明書(shū)中的配方制備反應(yīng)液。通常需要混合緩沖液、輔酶A、NADPH、蛋白質(zhì)樣品和熒光底物。
 
  3.反應(yīng)開(kāi)始:加入反應(yīng)液后,啟動(dòng)酶促反應(yīng)。這一步通常在37°C下進(jìn)行,持續(xù)時(shí)間為30分鐘至2小時(shí)不等。
 
  4.反應(yīng)停止:添加停止液或?qū)⒎磻?yīng)液放在冰上使反應(yīng)停止。
 
  5.測(cè)量熒光值:使用熒光分光光度計(jì)測(cè)量反應(yīng)液中的熒光值。熒光值與脂肪酸合成酶活性成正比。
 
  需要注意的是,使用脂肪酸合成酶測(cè)試盒時(shí)需要遵循說(shuō)明書(shū)中的操作步驟和安全注意事項(xiàng)。同時(shí),不同型號(hào)和品牌的測(cè)試盒操作方法可能略有差異,建議在使用前先仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

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