硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR) 活性測(cè)定試劑盒 技術(shù)文章
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硫氧還蛋白氧化還原酶(Thioredoxin Reductase, TrxR) 活性測(cè)定試劑盒
商品貨號(hào):QS1110
英文名稱:Oxidized Thioredoxin Reductase (TrxR) Assay Kit
別名:硫氧還蛋白氧化還原酶試劑盒 TrxR Kit 硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)試劑盒 硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測(cè)試盒
檢測(cè)方法:常量法
商品貨號(hào): | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價(jià) | 選擇規(guī)格 |
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QS1110-50管/48樣 | 索橋生物 | 50管/48樣 | ¥250.00元 |
- 產(chǎn)品詳細(xì)介紹
測(cè)定意義:
TrxR是一種NADPH依賴的包含F(xiàn)AD結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶,屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化還原酶家族成員,與硫氧還蛋白以及NADPH共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng)。TrxR與GR活性類似,催化GSSG還原生成GSH,是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。
測(cè)定原理:
TrxR催化NADPH還原DTNB生成TNB和NADP+,TNB在412 nm有特征吸收峰,通過(guò)測(cè)定412nm波長(zhǎng)處TNB的增加速率,即可計(jì)算TrxR活性。
- 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
貨號(hào):QS1110 規(guī)格:50 管/48 樣
硫氧還蛋白氧化還原酶(thioredoxin reductase, TrxR) 活性測(cè)定試劑盒說(shuō)明書(shū)
可見(jiàn)分光光度法
注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義:
TrxR 是一種 NADPH 依賴的包含 FAD 結(jié)構(gòu)域的二聚體硒酶,屬于吡啶核苷酸-二硫化物氧化 還原酶家族成員,與硫氧還蛋白以及 NADPH 共同構(gòu)成了硫氧還蛋白系統(tǒng)。TrxR 與 GR 活性類似, 催化 GSSG 還原生成 GSH,是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)關(guān)鍵酶之一。
測(cè)定原理:
TrxR 催化 NADPH 還原 DTNB 生成 TNB 和 NADP+,TNB 在 412 nm 有特征吸收峰,通過(guò)測(cè)定 412nm 波長(zhǎng)處 TNB 的增加速率,即可計(jì)算 TrxR 活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器: 可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、可調(diào)節(jié)移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體 90mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 5mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 5 mL 蒸餾水溶解。
粗酶液提?。?/strong>
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加 入 1mL 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí) 間 3min);然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體:直接測(cè)定。
TrxR 測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 412nm,用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一在 25℃(一般物種)或者 37℃(哺乳動(dòng)物)預(yù)熱 30min。
3. 測(cè)定管:取 1mL 玻璃比色皿,加入 100μ L 試劑二,100μ L 試劑三,700μ L 試劑一,100μ L 上清液,迅速混勻后于 412 nm 測(cè)定 10 s 和 310 s 吸光度,記為 A3 和 A4?!鰽 測(cè)定管=A2-A1。
TrxR 活性計(jì)算公式:
(1). 按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶活單位。
TrxR(nmol/min /mg prot)=△A 測(cè)定管÷ε ÷d×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T = 147×△A 測(cè)定管÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每克樣本每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶活單位。
TrxR(nmol/min /g 鮮重)=△A 測(cè)定管÷ε ÷d×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T= 147×△A 測(cè)定管÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每 104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶活單 位。
TrxR(nmol/min/104 cell)=△A 測(cè)定管÷ε ÷d×V 反總÷(細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總)÷T = 147×△A 測(cè)定管÷ 細(xì)胞數(shù)量
(4)按液體體積計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫升液體每分鐘催化 1nmol DTNB 還原為 1 個(gè)酶活單位。
TrxR(nmol/min /mL)=△A 測(cè)定管÷ε ÷d×V 反總÷V 樣÷T = 147×△A 測(cè)定管
ε :TNB 在 412nm 處的微摩爾消光系數(shù),0.0136 L/μ mol/cm;d:比色皿光徑,1cm;V 反總: 反應(yīng)體系總體積(L),1000μ L=0.001 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測(cè)定; V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液體積(mL),100μ L=0.1 mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;W, 樣本質(zhì)量,g;T:反應(yīng)時(shí)間(min),5 min。
注意事項(xiàng):
1. 測(cè)定前須先取 1~2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),哺乳動(dòng)物組織及血液制品 TrxR 活力測(cè)定時(shí),一般須用 蒸餾水稀釋 5 倍左右;測(cè)定過(guò)程操作須迅速。
2. 試劑二和試劑三配制好后 3 天內(nèi)使用完。
系列產(chǎn)品及單價(jià)
輔酶Ⅱ系列 | ||||
QS1100 | 輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/24樣 | 550 |
MS1100 | 輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1000 |
QS1101 | NADP磷酸酶(NADPase)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 520 |
MS1101 | NADP磷酸酶(NADPase)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 980 |
QS1102 | 6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脫氫酶測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 160 |
MS1102 | 6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脫氫酶測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 300 |
QS1103 | 胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 260 |
MS1103 | 胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 500 |
QS1104 | NADP蘋(píng)果酸酶(NADP-ME)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
MS1104 | NADP蘋(píng)果酸酶(NADP-ME)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
QS1105 | NAD-蘋(píng)果酸酶(NAD-ME)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 350 |
MS1105 | NAD-蘋(píng)果酸酶(NAD-ME)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 650 |
QS1106 | 6-磷酸葡糖糖酸脫氫酶(6PGDH)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 750 |
MS1106 | 6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
QS1107 | 肌酸激酶(CK)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 820 |
MS1107 | 肌酸激酶(CK)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1500 |
QS1108-10 | 脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 10管/9樣 | 1200 |
QS1108-25 | 脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
QS1108-50 | 脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
MS1108 | 脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 6000 |
QS2508 | 蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 1600 |
MS2508 | 蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 3000 |
QS1110 | 硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測(cè)試盒 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | 250 |
MS1110 | 硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 450 |
QS1111 | 谷胱甘肽還原酶(GR)測(cè)試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 260 |
MS1111 | 谷胱甘肽還原酶(GR)測(cè)試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 500 |