谷胱甘肽還原酶(GR)活性測定試劑盒說明書 技術(shù)文章
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谷胱甘肽還原酶(Glutathione Reductase, GR)活性測定試劑盒
商品貨號:QS1111
英文名稱:Glutathion Reductases(GR) Assay Kit
別名:谷胱甘肽還原酶試劑盒 GR Kit 谷胱甘肽還原酶(GR)試劑盒 谷胱甘肽還原酶(GR)測試盒
檢測方法:常量法
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價 | 選擇規(guī)格 |
---|---|---|---|---|
QS1111-50管/48樣 | 索橋生物 | 50管/48樣 | ¥260.00元 |
- 產(chǎn)品詳細介紹
測定意義:
GR是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶,是谷胱甘肽氧化還原循環(huán)的關鍵酶之一(通常昆蟲中GR被TrxR取代)。GR催化NADPH還原GSSG生成GSH,有助于維持體內(nèi)GSH/GSSG比值。GR在氧化脅迫反應中對活性氧清除起關鍵作用,此外GR還參與抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)途徑。
測定原理:
GR能催化NADPH還原GSSG再生GSH,同時NADPH脫氫生成NADP+;NADPH在340 nm有特征吸收峰,相反NADP+在該波長無吸收峰;通過測定340 nm吸光度下降速率來測定NADPH脫氫速率,從而計算GR活性。
- 產(chǎn)品說明書
貨號:QS1111 規(guī)格:50 管/48 樣
谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase, GR)活性測定試劑盒說明書
紫外分光光度法
注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
GR 是廣泛存在于真核和原核生物中的一種黃素蛋白氧化還原酶,是谷胱甘肽氧化還原循 環(huán)的關鍵酶之一(通常昆蟲中 GR 被 TrxR 取代)。GR 催化 NADPH 還原 GSSG 生成 GSH,有助于維 持體內(nèi) GSH/GSSG 比值。GR 在氧化脅迫反應中對活性氧清除起關鍵作用,此外 GR 還參與抗壞 血酸-谷胱甘肽循環(huán)途徑。
測定原理:
GR 能催化 NADPH 還原 GSSG 再生 GSH,同時 NADPH 脫氫生成 NADP+;NADPH 在 340 nm 有特 征吸收峰,相反 NADP+在該波長無吸收峰;通過測定 340 nm 吸光度下降速率來測定 NADPH 脫氫 速率,從而計算 GR 活性。
自備實驗用品及儀器:
紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、移液器、1mL 石英比色皿和蒸餾水
試劑組成和配置:
試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加入 5.0 mL 蒸餾水,混勻。
試劑三:液體×1 支,4℃保存。
粗酶液提?。?/strong>
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加 入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心 15min,取上清,置冰上待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時 間 3min);然后 8000g,4℃,離心 15min,取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體:直接測定。
操作步驟:
1. 分光光度計預熱 30 min,調(diào)節(jié)波長到 340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一置于 25℃(普通物質(zhì))或者 37℃(哺乳動物)中預熱 30min。
3. 空白管:取 1mL 石英比色皿,加入 850μ L 試劑一,100μ L 試劑二,50μ L 試劑三,充分混 勻,于 340nm 處測定 10 s 和 190 s 吸光度,記為 A 空 1 和 A 空 2,△A 空白管= A 空 1﹣A 空 2。
4. 測定管:取 1mL 石英比色皿,加入 750μ L 試劑一,100μ L 試劑二,100μ L 上清液,50μ L 試劑三,充分混勻,于 340nm 測定 10 s 和 190 s 吸光度,記為 A 測 1 和 A 測 2,△A 測定管= A 測 1﹣A 測 2。
注意:空白管只需要測定一次。
計算公式:
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每毫克蛋白每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GR 酶活(nmol/min/mg prot)= [ (△A 測定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反總×109 ]÷[Cpr×V 樣]÷T = 536×(△A 測定管-△A 空白管)÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每克樣本每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個 酶活單位。
GR 酶活(nmol/min/g)= [ (△A 測定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反總×109 ] ÷(W×V 樣÷V 樣 總)÷T = 536×(△A 測定管-△A 空白管)÷W
(3) 按細胞數(shù)量計算
活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每 104個細胞每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GR 酶活(nmol/min/104 cell)= [ (△A 測定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反總×109 ] ÷(細胞數(shù) 量×V 樣÷V 樣總)÷T = 536×(△A 測定管-△A 空白管)÷細胞數(shù)量
(4)按液體體積計算
活性單位定義:在一定溫度中,pH8.0 條件下,每毫升液體每分鐘催化 1nmol NADPH 氧化為 1 個酶活單位。
GR 酶活(nmol/min/mL)= [ (△A 測定管-△A 空白管)÷ε ÷d×V 反總×109 ]÷×V 樣÷T = 536×(△A 測定管-△A 空白管)
ε :NADPH 摩爾消光系數(shù) 6.22×103 L/mol/cm;V 反總:反應體系總體積,1000μ L=0.001 L; 106:1 mol=1×106 μ mol; Cpr:上清液蛋白濃度(mg/mL);V 樣:加入反應體系中上清液體 積,100μ L =0.1 mL;V 樣總:加入提取液體積,1mL;W,樣本質(zhì)量,g;T:反應時間,3 min。
注意事項:
(1)樣品處理等過程均需要在冰上進行,且須在當日測定酶活力,勻漿液避免反復凍融;
(2)試劑二須現(xiàn)配現(xiàn)用,配制完后,置于冰上,未使用完的 4℃保存,三天內(nèi)使用完。
(3)測定前須先用 1~2 個樣做預實驗,確保 180s 內(nèi)吸光值變化呈線性,哺乳動物組織一般 須用試劑一稀釋 2~5 倍;
(4)細胞中 GR 活性測定時,細胞數(shù)目須在 300 萬-500 萬之間,細胞中 GR 的提取時可加試劑 一后研磨或超聲波處理,不能用細胞裂解液處理細胞。
系列產(chǎn)品及單價
輔酶Ⅱ系列 | ||||
QS1100 | 輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 550 |
MS1100 | 輔酶ⅡNADP(H)含量測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1000 |
QS1101 | NADP磷酸酶(NADPase)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 520 |
MS1101 | NADP磷酸酶(NADPase)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 980 |
QS1102 | 6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脫氫酶測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 160 |
MS1102 | 6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖-6-磷酸脫氫酶測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 300 |
QS1103 | 胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 260 |
MS1103 | 胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 500 |
QS1104 | NADP蘋果酸酶(NADP-ME)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 320 |
MS1104 | NADP蘋果酸酶(NADP-ME)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 600 |
QS1105 | NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 350 |
MS1105 | NAD-蘋果酸酶(NAD-ME)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 650 |
QS1106 | 6-磷酸葡糖糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 750 |
MS1106 | 6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1400 |
QS1107 | 肌酸激酶(CK)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 820 |
MS1107 | 肌酸激酶(CK)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1500 |
QS1108-10 | 脂肪酸合成酶(FAS)測試盒 | 紫外分光光度法 | 10管/9樣 | 1200 |
QS1108-25 | 脂肪酸合成酶(FAS)測試盒 | 紫外分光光度法 | 25管/24樣 | 2000 |
QS1108-50 | 脂肪酸合成酶(FAS)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 3200 |
MS1108 | 脂肪酸合成酶(FAS)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 6000 |
QS2508 | 蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 1600 |
MS2508 | 蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 3000 |
QS1110 | 硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 250 |
MS1110 | 硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 450 |
QS1111 | 谷胱甘肽還原酶(GR)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 260 |
MS1111 | 谷胱甘肽還原酶(GR)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 500 |