6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒說明書 技術文章

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6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒

商品貨號：QS1102
英文名稱：6-phosphate Dehydrogenase（G6PDH）Assay Kit
別名：6-磷酸葡萄糖脫氫酶試劑盒 G6PDH Kit 6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒 6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）測試盒
檢測方法：常量法

• 產品詳細介紹

測定意義：

G6PDH廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是磷酸戊糖途徑的關鍵酶，催化 6-磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內酯，同時將NADP+還原為NADPH，供生物合成及維持細胞內的還原狀態(tài)用。因此6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程度上反映出生物體的生物合成和抗氧化能力。

測定原理：

G6PDH催化NADP+還原生成NADPH，在340 nm下測定NADPH增加速率。

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• 產品說明書
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貨號: QS1102                                              規(guī)格：50 管/48 樣

  6-磷酸葡萄糖脫氫酶（G6PDH）試劑盒說明書 紫外分光光度法

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義： G6PDH 廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，是磷酸戊糖途徑的關鍵酶，催化 6- 磷酸葡萄糖氧化為 6 -磷酸葡萄糖酸內酯，同時將 NADP+還原為 NADPH，供生物合成及維持 細胞內的還原狀態(tài)用。因此 6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性的高低可以從一定程度上反映出生物體的 生物合成和抗氧化能力。

測定原理： G6PDH 催化 NADP+還原生成 NADPH，在 340 nm 下測定 NADPH 增加速率。

自備實驗用品及儀器： 紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 ml 石英比色皿、研缽、冰和蒸 餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體 60 ml×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 50 ml×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存；用時每支加 550μl 雙蒸水充分溶解備用；剩余的 4℃保存 一周；

試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；用時每只加 550μl 雙蒸水充分溶解備用；剩余的 4℃保存 一周；

操作步驟：

一、樣品測定的準備：

1、細菌或培養(yǎng)細胞：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清，按照細菌或細胞數(shù)量（10⁴ 個）：提取液體積（ml）為 500~1000:1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液）， 超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次），8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質量（g）：提取液體積（ml）為 1:5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

二、測定操作：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調零。

2、將試劑一置于 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）水浴中預熱 10min 左右。

3、加樣表

試劑名稱（μl）     測定管

試劑一            750

試劑二            10

試劑三            10

樣本              30

      加樣本的同時開始計時；混勻，在 340 nm 波長下記錄 1min 時的初始吸光度 A1 和 6min 時的吸光度 A2，計算 ΔA=A2-A1。

注意事項：

若 ΔA 大于 0.5，需將酶液用提取液稀釋，計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù)。或將反應時間縮 短至 2min，使 A2-A1 小于 0.5，可提高檢測靈敏度。

G6PDH 活力單位的計算：

1、血清（漿）G6PDH 活力的計算:

單位的定義：每 ml 血清（漿）每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDH（U/ml）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109 ]÷V 樣÷T=857×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 G6PDH 活力計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDH（U/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹ ]÷(V 樣×Cpr) ÷T=857×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算 單位的定義：每 g 組織每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。   G6PDH（U/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹ ]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T=857×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算 單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘生成 1 nmol 的 NADPH 定義為一個酶活力單位。

G6PDH（U/10⁴ cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹ ]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T=1.715×ΔA

V 反總：反應體系總體積，8×10^-4 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d：比 色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 ml；V 樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應 時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。

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