谷氨酸脫氫酶(GDH)試劑盒說明書 技術文章
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谷氨酸脫氫酶(Glutamate Dehydrogenase,GDH)活性檢測試劑盒
商品貨號:MS1803
英文名稱:Micro Glutamic Acid Dehydrogenase(GDH)Assay Kit
別名:谷氨酸脫氫酶試劑盒 GDH Kit 谷氨酸脫氫酶(GDH)試劑盒 谷氨酸脫氫酶(GDH)測試盒
檢測方法:微量法
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價 | 選擇規(guī)格 |
---|---|---|---|---|
MS1803 -100管/96樣 | 索橋生物 | 100管/96樣 | ¥1100.00元 |
- 產(chǎn)品詳細介紹
測定意義:
GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成,在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。
測定原理:
GDH催化NH4+、α-酮戊二酸和NADH,生成谷氨酸和NAD+,引起340nm吸光度下降。通過測定340nm吸光度的下降速率,計算GDH活性。
- 產(chǎn)品說明書
貨號:QS1803 規(guī)格:50 管/48 樣
谷氨酸脫氫酶(Glutamate dehydrogenase,GDH)試劑盒說明書 紫外分光光度法
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
GDH(EC 1.4.1.2)廣泛分布于植物中,和谷氨酸合成酶(GOGAT)共同參與谷氨酸的合成, 在氨同化和轉(zhuǎn)化成有機氮化合物的代謝中起重要作用。
測定原理:
GDH 催化 NH4 +、α -酮戊二酸和 NADH,生成谷氨酸和 NAD+,引起 340nm 吸光度下降。通過 測定 340nm 吸光度的下降速率,計算 GDH 活性。
自備實驗用品及儀器:
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 支,4℃保存;
試劑三:粉劑×1 支,4℃保存;
試劑四:粉劑×1 支,-20℃保存。
粗酶液提取:
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(10^4 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超 聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃ 離心 10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織, 加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
1、分光光度計預熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
(1)工作液的配制:臨用前將試劑二、三、四轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解,置于 37℃(哺乳動 物)或 25℃(其它物種)水浴 5min;現(xiàn)配現(xiàn)用;
(2)取 0.05mL 樣本和 1mL 工作液于 1mL 比色皿中,混勻,加工作液的同時開始計時,在 340 nm 波長下記錄 20 秒時的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒時的吸光度 A2,計算 Δ A=A1-A2。
GDH 活性計算:
1、血清(漿)中 GDH 活力的計算:
單位的定義:每毫升血清(漿)每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 GDH(nmol/min/mL)=[Δ A×V 反總÷(ε ×d)×10^9 ]÷V 樣÷T=675×Δ A
2、組織、細菌或細胞中 GDH 活力的計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算:
單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
GDH(nmol/min /mg prot)=[Δ A×V 反總÷(ε ×d)×10^9 ]÷(V 樣×Cpr) ÷T=675×Δ A÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算:
單位的定義:每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。
GDH ( nmol/min /g 鮮 重 ) = [Δ A×V 反 總 ÷ ( ε ×d ) ×10^9 ]÷(W× V 樣 ÷V 樣 總 ) ÷T=675×Δ A÷W
(3)按細菌或細胞密度計算:
單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol NADH 定義為一個酶活力單位。 GDH(nmol/min /10^4 cell)=[Δ A×V 反總÷(ε ×d)×10^9 ]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=1.35×Δ A
V 反總:反應體系總體積,1.05×10^-3 L;ε :NADH 摩爾消光系數(shù),6.22×10^3 L / mol /cm; d:比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.05 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T: 反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細菌或細胞總數(shù), 500 萬。
系列產(chǎn)品及價格
氮代謝系列 | ||||
QS1800 | 硝酸還原酶(NR)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 240 |
MS1800 | 硝酸還原酶(NR)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 450 |
QS1801 | 谷氨酸合成酶(GOGAT)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 500 |
MS1801 | 谷氨酸合成酶(GOGAT)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 950 |
QS1802 | 谷氨酰胺酶(GLS)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 580 |
MS1802 | 谷氨酰胺酶(GLS)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1100 |
QS1803 | 谷氨酸脫氫酶(GDH)測試盒 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | 580 |
MS1803 | 谷氨酸脫氫酶(GDH)測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 1100 |
QS1805 | 水土中亞硝酸鹽含量測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 140 |
MS1805 | 水土中亞硝酸鹽含量測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 270 |
QS1806 | 食品中亞硝酸鹽含量測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 200 |
MS1806 | 食品中亞硝酸鹽含量測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 380 |
QS1807 | 谷氨酰胺合成酶(GS)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 280 |
MS1807 | 谷氨酰胺合成酶(GS)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 550 |
QS1808 | 植物硝態(tài)氮測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 360 |
MS1808 | 植物硝態(tài)氮測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 700 |
QS1811 | 植物氨態(tài)氮測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 500 |
MS1811 | 植物氨態(tài)氮測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 960 |
QS1812 | 尿素氮測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/48樣 | 70 |
MS1812 | 尿素氮測試盒 | 微量法 | 100管/96樣 | 100 |
QS1813 | 亞硝酸還原酶(NiR)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 650 |
MS1813 | 亞硝酸還原酶(NiR)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 1250 |
QS1814 | 脲酶(UE)測試盒 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | 380 |
MS1814 | 脲酶(UE)測試盒 | 微量法 | 100管/48樣 | 750 |