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ELISA樣本處理及要求

更新時間:2011-02-22  |  點擊率:2838

樣本處理及要求 :
1. 血清 : 室溫血液自然凝固 10-20 分鐘 , 離心 20 分鐘左右 ( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分 ) 。 仔細(xì)收集上
清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。
2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合 10-20 分鐘后,離 心
20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分 ) 。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分 ) 。仔細(xì)收集上清,保存過程
中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清 : 檢測分泌性的成份時 , 用無菌管收集 。 離心 20 分鐘左右 ( 2000-3000 轉(zhuǎn) /
分 ) 。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用 PBS ( PH7.2-7.4 )稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到 100 萬 /ml 左右 。 通過反復(fù)凍融 , 以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份 。 離心 20 分
鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分 ) 。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
5.組織標(biāo)本 : 切割標(biāo)本后 , 稱取重量 。 加入一定量的 PBS , PH7.4 。 用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標(biāo)本融化后仍然保持 2-8 ℃ 的溫度。加入一定量的 PBS ( PH7.4 ) ,用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分。離心 20 分鐘左右( 2000-3000 轉(zhuǎn) / 分 ) 。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待
檢測,其余冷凍備用。
6.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上
進(jìn)行試驗,可 將標(biāo)本放于 -20 ℃ 保存,但 應(yīng) 避免反復(fù)凍融 .
7.不能檢測含 NaN3 的樣品 ,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的( HRP )活性。

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