蛋白電泳（PAGE）聚丙烯酰胺凝膠是由單體丙烯酰胺和交聯(lián)劑N,N-甲叉雙丙烯酰胺在加速劑N，N，N，N—四甲基乙二胺（簡稱TEMED）和催化劑過硫酸銨（簡稱AP）或核黃素（即vitaminB2）的作用下聚合交聯(lián)成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，以此凝膠為支持物的電泳稱為聚丙烯酰胺凝膠電泳（polyacrylamidegelelectrophoresis，簡稱PAGE）S...

胍鹽/β-巰基乙醇法適用于各種不同動(dòng)物材料和次生代謝物少的植物材料。在這種方法中，胍鹽使細(xì)胞充分裂解，β-巰基乙醇作為蛋白的變性劑在實(shí)驗(yàn)全程中可以抑制RNase的活性，保護(hù)RNA不被降解。

異硫氰酸胍/苯酚法異硫氰酸胍/苯酚法是一種傳統(tǒng)的RNA提取方法，適用于大部分動(dòng)植物材料，但對于次生代謝產(chǎn)物較多的植物材料提取RNA效果較差。異硫氰酸胍能使核蛋白復(fù)合體解離，并將RNA釋放到溶液中，采用酸性酚/氯仿混合液抽提，低pH值的酚將使RNA進(jìn)入水相，而蛋白質(zhì)和DNA仍留在有機(jī)相，從而可以完成RNA的提取工作。Solarbio公司的Trizol和總RNA...

DNA的儲(chǔ)存儲(chǔ)存溶液：DNA為兩性解離分子，在堿性條件下較穩(wěn)定，因此一般用TE（pH8.0）保存。TE的成分為：10mMTris-HCl（Tris與鹽酸形成強(qiáng)的緩沖對）；1mMEDTA（乙二胺四乙酸，能螯合二價(jià)金屬陽離子，抑制DNase的活性）；pH8.0（堿性條件可減少DNA的脫氨作用，防止降解）。ddH2O的正常pH值為7.0，可作為DNA的儲(chǔ)存液，但有...

基因組DNA提取的原則1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性（因?yàn)檫z傳信息全部儲(chǔ)存在核酸一級結(jié)構(gòu)中，故完整的一級結(jié)構(gòu)是保證核酸結(jié)構(gòu)與功能研究的基礎(chǔ)）。2、排除其它分子（如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、有機(jī)溶劑等）的污染，使下游試驗(yàn)順利進(jìn)行。

RNA純化及獲得純化要求RNA樣品中不應(yīng)存在對酶（如逆轉(zhuǎn)錄酶）有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染。排除DNA分子的污染。純化方法及沉淀1、有機(jī)溶劑抽提法氯仿抽提：在使用RNA提取試劑進(jìn)行RNA提取時(shí)，常使用氯仿進(jìn)行抽提，以去除蔗糖、蛋白等雜質(zhì)，并促進(jìn)水相與有機(jī)相的分離，從而達(dá)到純化RNA的目的。沉淀：氯...

RNA評價(jià)與鑒定提取得到RNA溶液后，我們需要對RNA進(jìn)行相關(guān)的質(zhì)量檢測，以確定它是否符合后續(xù)實(shí)驗(yàn)的要求。RNA用于不同的后續(xù)實(shí)驗(yàn)，對其質(zhì)量要求不盡相同。cDNA文庫構(gòu)建要求RNA完整且無酶等抑制物殘留；Northernblot實(shí)驗(yàn)對RNA完整性要求較高，對酶反應(yīng)抑制物殘留要求較低；RT-PCR實(shí)驗(yàn)對RNA完整性要求不太高，但對酶反應(yīng)抑制物殘留要求嚴(yán)格。因此...

RNA的保護(hù)與DNA提取實(shí)驗(yàn)相比，RNA的提取實(shí)驗(yàn)常常較為困難，這主要是由于RNA非常容易降解。而造成RNA降解的原因來自內(nèi)因和外因兩個(gè)方面。內(nèi)因：RNA核糖殘基的2’和3’位置帶有羥基，易被水解；外因：生物體內(nèi)和外部環(huán)境中存在大量RNase，并且RNase不易失活，高溫后仍然能夠正確折疊恢復(fù)活性。因此，從樣品的儲(chǔ)存、RNA的提取以及RNA提取完成后的保存，...

細(xì)胞從培養(yǎng)皿上的解離以下通用步驟可以在保持細(xì)胞完整性的同時(shí)從培養(yǎng)器皿中分離多種細(xì)胞系。但這一步驟不能廣泛適用于所有細(xì)胞系。應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)來確定不同體系所需的佳條件和濃度。?在傳代培養(yǎng)時(shí)監(jiān)測細(xì)胞存活率。?細(xì)胞存活率應(yīng)大于90%。?對于無血清培養(yǎng)基，建議降低胰酶用量。1．去除器皿中原有細(xì)胞培養(yǎng)基。2．用不含鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA清洗細(xì)胞。將清洗溶液加到培養(yǎng)瓶中與...

原代組織細(xì)胞的解離從原代組織上獲取單個(gè)細(xì)胞懸液的常用方法是利用酶的解聚作用。盡量縮短用酶處理細(xì)胞的時(shí)間，以獲得高的存活率。按下面的方法解聚整個(gè)組織，以獲得大量細(xì)胞。胰酶1．先去除無關(guān)組織，然后用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。通過在不含鈣鎂的平衡鹽溶液進(jìn)行重懸來清洗組織碎塊。待組織碎塊沉降后去掉上清液。重復(fù)清洗2-3次。2．將裝有組織碎塊的容...

深低溫保藏細(xì)胞的解凍深低溫保藏的細(xì)胞十分脆弱，要輕柔操作。快速解凍深低溫保藏的細(xì)胞，然后直接將其接種到*生長培養(yǎng)基中，如果細(xì)胞對抗凍劑（DMSO或甘油）特別敏感，則離心除去抗凍劑，然后將細(xì)胞接種到*生長培養(yǎng)基中。下面是深低溫保藏細(xì)胞的建議解凍步驟：直接接種法1．從凍存管中取出細(xì)胞，用37℃水浴快速解凍。2．將細(xì)胞直接接種到*生長培養(yǎng)基中。每毫升凍存細(xì)胞需要1...

使用抗生素和抗真菌素進(jìn)行去污培養(yǎng)當(dāng)不可替代的培養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生污染時(shí)，研究人員可以嘗試消除或控制污染。首先，確定污染類型是細(xì)菌、真菌、支原體還是酵母。將污染的培養(yǎng)物與其他細(xì)胞系隔離。實(shí)驗(yàn)用消毒劑清洗培養(yǎng)箱和層流通風(fēng)櫥，檢查HEPA（粒子空氣）過濾器。高濃度的抗生素和抗真菌素可能對某些細(xì)胞系有毒害作用。因此，應(yīng)測定劑效關(guān)系以確定抗生素和抗真菌素的毒性劑量。這一點(diǎn)在使...

DNA產(chǎn)物純化試劑盒簡介：對于TA克隆、酶切或者直接測序等試驗(yàn)來說，純化PCR產(chǎn)物或酶切產(chǎn)物是非常必要的。以TA克隆為例，其成功率跟目的片段的純度高低具有重要關(guān)系。雖然未經(jīng)過純化的PCR產(chǎn)物也可以跟載體連接，但會(huì)增加篩選陽性克隆的難度，因?yàn)镻CR產(chǎn)物中的dNTP和引物等可能也會(huì)跟載體連接。在進(jìn)行連接試驗(yàn)時(shí)，這些非特異性的產(chǎn)物會(huì)跟特異性產(chǎn)物相互競爭，從而導(dǎo)致連...

質(zhì)粒提取試劑盒簡介：質(zhì)粒（Plasmid）是一種染色體外的穩(wěn)定遺傳因子，大小從1-200kb不等，為雙鏈、閉環(huán)的DNA分子，并以超螺旋狀態(tài)存在于宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒主要存在于細(xì)菌、放線菌和真菌細(xì)胞中，它具有自主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄能力，能在子代細(xì)胞中保持恒定的拷貝數(shù)，并表達(dá)所攜帶的遺傳信息。質(zhì)粒提取原理及流程：較常用的質(zhì)粒DNA提取方法有3種：堿裂解法、煮沸法和去污劑（如...

基因組DNA提取試劑盒簡介：DNA是遺傳信息的載體，是重要的生物信息分子，是分子生物學(xué)研究的主要對象，為了進(jìn)行測序、雜交、基因表達(dá)、文庫構(gòu)建等試驗(yàn)，獲得高分子量和高純度的基因組DNA是非常重要的前提，因此基因組DNA的提取也是分子生物學(xué)試驗(yàn)技術(shù)中重要、基本的操作之一。Solarbio公司提供各種不同樣品基因組DNA提取試劑盒，如植物、動(dòng)物、細(xì)菌、細(xì)胞、血液、...