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技術(shù)文章
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  • 點突變的相關(guān)基因型
    2010-03-29
    點突變相關(guān)的基因型mutS(Mutator)功能:mutS基因表達(dá)的蛋白具有識別DNA上錯配序列的功能,并能修復(fù)其錯配序列(GC→AT),防止基因突變。mutS基因的變異導(dǎo)致DNA的錯配序列不能得到修復(fù),容易發(fā)生基因突變,這對于利用點突變進行基因改造是有利的。dut(dUTPase)功能:dut基因表達(dá)脫氧尿嘧啶三磷酸核苷酸水解酶(dUTPase),它能水解...
  • 甲基化相關(guān)的基因型
    2010-03-29
    甲基化相關(guān)的基因型dam(DNAadeninemethylase)功能:dam基因表達(dá)DNA腺嘌呤甲基化酶,它能催化特異序列GATC中A的甲基化,保證DNA免受限制性核酸內(nèi)切酶MboI的切斷,同時在DNA復(fù)制時也起一定的輔助作用。dam基因的變異導(dǎo)致腺嘌呤(A)甲基化酶活性的缺失,使腺嘌呤(A)不被甲基化,易于獲得非甲基化質(zhì)粒。dcm(DNAcytosine...
  • 基因重組相關(guān)的基因型
    2010-03-29
    基因重組相關(guān)的基因型recA(Recombination)功能:recA基因表達(dá)ATP依賴型DNA重組酶,它在λ噬菌體與基因組DNA的溶原重組時起作用,同時具有對DNA放射性損傷的修復(fù)功能。由recA基因的變異所產(chǎn)生的基因型使同源或異源DNA的重組不能進行,保持插入DNA的穩(wěn)定性,對DNA的轉(zhuǎn)化有利。一個菌株的基因型如果是recA,則說明此菌株的表現(xiàn)型是重組...
  • Northern blot技術(shù)
    2010-03-24
    Northernblot技術(shù)經(jīng)乙二醛和二甲基亞砜變性處理后進行的RNA電泳這一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。含有乙二醛-DMSO的凝膠比含有甲醛的凝膠更難于進行電泳,因為前者泳動速率較慢而且需將電泳液時行循環(huán)以避免電泳過程中形成過高的H+梯度。盡管上述兩種凝膠具有近乎相等的分辨率(Miller,1987),但用含朋乙二醛-DMS...
  • 植物組織RNA提取
    2010-03-24
    植物組織RNA提取的難點及對策從植物組織中提取RNA是進行植物分子生物學(xué)方面研究的必要前提。要進行Northern雜交分析,純化mRNA以用于體外翻譯或建立cDNA文庫,RT-PCR及差示分析等分子生物學(xué)研究,都需要高質(zhì)量的RNA。因此,從植物組織中提取純度高、完整性好的RNA是順利進行上述研究的關(guān)鍵所在。a)*Y(WL從文獻報道上看,有許多植物就是由于未能...
  • 復(fù)蘇方法
    2010-03-15
    復(fù)蘇方法1.從液氮罐中取出安剖;有時因安剖未封嚴(yán),浸入了液氮,取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護眼睛和手套。2.迅速放入盛有36℃~37℃水的搪瓷罐中,扣上蓋并不時搖動,盡快解凍。3.剪開紗布口袋,取出安剖,用70%酒精擦拭消毒后,凈化臺上打開蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液,裝入離心管中,再補加10ml培養(yǎng)液,吹打使細(xì)胞懸浮。4.低速離心(500~...
  • 蛋白質(zhì)提取的方法
    2010-03-15
    蛋白質(zhì)提取的方法總匯1、植物組織蛋白質(zhì)提取方法1、根據(jù)樣品重量(1g樣品加入3.5ml提取液,可根據(jù)材料不同適當(dāng)加入),準(zhǔn)備提取液放在冰上。2、把樣品放在研缽中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上靜置(3-4小時)。3、用離心機離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜,樣品制備完成。蛋白質(zhì)提取液:300ml1、1Mtri...
  • 幾種常用轉(zhuǎn)化細(xì)胞的轉(zhuǎn)化
    2010-03-15
    幾種常用轉(zhuǎn)化細(xì)胞和轉(zhuǎn)化技術(shù)1)致癌化學(xué)物轉(zhuǎn)化細(xì)胞:轉(zhuǎn)化敘利亞地鼠胚胎細(xì)胞實驗1.取材:妊娠后第13天取材,取數(shù)個同窩胚胎,去頭和內(nèi)臟,在無菌條件下剪碎至米粒大小,再用0.25%胰蛋白酶(含0.01%EDTA)37℃消化30分鐘,濾過、低速離心、吸除消化液、加入營養(yǎng)液、制備成細(xì)胞懸液、接種入75cm/培養(yǎng)瓶中,接種密度10~20×106/75cm,37℃培養(yǎng)2...
  • 如何提高RT-PCR反應(yīng)體系的靈敏度
    2010-03-10
    如何提高RT-PCR反應(yīng)體系的靈敏度:1、分離高質(zhì)量RNA成功的cDNA合成來自高質(zhì)量的RNA。高質(zhì)量的RNA應(yīng)保證全長并且不含逆轉(zhuǎn)錄酶的抑制劑如EDTA或SDS等,以及盡可能減少基因組DNA污染。RNA的質(zhì)量決定了你能夠轉(zhuǎn)錄到cDNA上的序列信息量的大值。2、使用無RNaseH活性的逆轉(zhuǎn)錄酶在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中經(jīng)常加入RNase抑制劑以增加cDNA合成的長度和產(chǎn)...
  • 影響質(zhì)粒提取的因素
    2010-03-08
    影響質(zhì)粒提取的因素:質(zhì)粒提取的得率和質(zhì)量與很多因素有關(guān),如宿主菌的種類和培養(yǎng)條件、細(xì)胞的裂解、質(zhì)??截悢?shù)、質(zhì)粒的穩(wěn)定性、抗生素、吸附柱的吸附量等。宿主菌種類質(zhì)粒主要存在于細(xì)菌、放線菌和真菌細(xì)胞中,多數(shù)情況下我們是從大腸桿菌中提取質(zhì)粒。大腸桿菌的菌株不同會影響質(zhì)粒提取的質(zhì)量。從宿主菌如DH5α和*0中可以得到高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。HBl01和它的衍生菌株,如TG...
  • 質(zhì)粒提取原理及流程
    2010-03-08
    質(zhì)粒提取原理及流程:較常用的質(zhì)粒DNA提取方法有3種:堿裂解法、煮沸法和去污劑(如Triton和SDS)裂解法。前兩種方法比較劇烈,適用于較小的質(zhì)粒(15kb)。堿裂解法是一種應(yīng)用為廣泛的制備質(zhì)粒DNA的方法,其原理為:染色體DNA比質(zhì)粒DNA分子大得多,且染色體DNA為線狀分子,而質(zhì)粒DNA為共價閉合環(huán)狀分子;當(dāng)用堿處理DNA溶液時,線狀染色體DNA容易發(fā)...
  • 質(zhì)粒DNA分離和純化
    2010-03-08
    質(zhì)粒DNA分離和純化:純化要求質(zhì)粒DNA中不應(yīng)存在對后續(xù)實驗中的酶活性有抑制作用的有機溶劑分子或過高濃度的金屬離子。避免其它生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、基因組和RNA的污染。不同的后續(xù)實驗對于質(zhì)粒純度的要求不同,常規(guī)的分子生物學(xué)實驗(如酶切、測序等)普通純度的質(zhì)粒即可滿足實驗,而對于轉(zhuǎn)染實驗,要求質(zhì)粒的純度較高(如高純度或無內(nèi)毒素)??梢赃x擇不同的質(zhì)粒提...
  • Lowry法蛋白濃度測定
    2010-02-27
    Lowry法蛋白濃度測定目錄號規(guī)格價格PC0030-10001000T280.00產(chǎn)品簡介:Lowry法包括兩步反應(yīng):*步是在堿性條件下,蛋白質(zhì)與銅作用生成蛋白質(zhì)-銅絡(luò)合物;第二步是此絡(luò)合物將Folin試劑還原,產(chǎn)生深藍(lán)色,顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比。定量范圍為5~100μg/ml蛋白質(zhì)。Folin試劑顯色反應(yīng)由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起,因此樣品中若含有...
  • BCA蛋白濃度測定
    2010-02-27
    BCA蛋白濃度測定目錄號規(guī)格價格PC0020-500500T280.00產(chǎn)品簡介:Bicinchoninicacid(BCA)法是在世界上常用的蛋白濃度檢驗方法之一BCA法基礎(chǔ)上改進而成。其原理與Lowery法蛋白定量相似,即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)與Cu2+絡(luò)合并將Cu2+還原成Cu+。兩分子BCA與一個Cu+螯合形成穩(wěn)定的紫藍(lán)色復(fù)合物,在562nm處有高的光吸...
  • Bradford蛋白濃度測定
    2010-02-27
    Bradford蛋白濃度測定目錄號規(guī)格價格PC0010-25002500T150.00產(chǎn)品簡介:Bradford法是常用的蛋白質(zhì)快速定量方法。CoomassiebrilliantblueG-250與蛋白質(zhì)結(jié)合使染料的大吸收峰由465nm變?yōu)?95nm,溶液的顏色由棕色變?yōu)樘m色,595nm波長下吸光度值與蛋白含量成正比。靈敏度比Lowry法高4倍,與BCA法相...
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